PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS UTILIZANDO SÊMEN CONGELADO/DESCONGELADO ADICIONADO DE EXTRATO NATURAL (NP) AO MEIO DILUENTE - RESULTADOS PARCIAIS

Resumo

Na busca por métodos que levem a viabilidade do sêmen bovino, especificamente para utilização eficiente na produção in vitro de embriões, mesmo após as injúrias da criopreservação, se faz necessário estudos capazes de aumentar a qualidade dos espermatozoides nesse processo. Assim, objetivou-se com esse estudo, utilizar sêmen congelado/descongelado acrescido de diferentes concentrações de extrato natural (NP) com potencial antioxidante na PIVE. Para tanto, coletou-se ovários de abatedouro, que foram transportados ao laboratório em solução salina aquecida (35–36,5°C), e antibiótico. Os COCs aspirados de folículos antrais (2–8 mm) foram selecionados (Grau I, II e III) baseando-se na morfologia e quantidade de células do cumulus, e a PIVE realizada com dois meios de cultivo, um meio base (TCM-199 estoque, TL estoque,heparina e SOF) e um meio comercial (BioKlone®). Os COCs viáveis foram divididos entre os grupos e levados a MIV por 22-24 horas em criotubos (400uL de meio de maturação recobertos por 125uL de óleo mineral-  Irvine®) e incubados (38,5°C - 5% CO₂). A FIV foi realizada em gotas (40uL - meio FIV) e fertilizadas com sêmen de quatro grupos contendo diferentes concentrações de um extrato natural (NP - 0% controle; 0,5%; 0,75% e 1%), avaliados pelo CASA, processados ecapacitados por gradiente de Percoll (90% e 45%) em conjunto com o meio de FIV e heparina. 18 à 22 horas após fertilização, os zigotos de cada grupo, foram cultivados (gotas 100 uL - meio SOF - recobertos 3,5 mL de óleo mineral), em atmosfera controlada (5%CO₂/5%O₂/90%N₂). A clivagem de cada grupo foi avaliada as 48 horas e a taxa de blastocistos observada no sétimo dia, após a FIV. Realizou-se duas rotinas de PIVE, sendo que os resultados médios para o grupo controle, considerando o meio base e o comercial, foram 21 e 24 COCs totais e viáveis, 61,66% e 56,04% de taxa de clivagem, 48,33% e 38,35% de formação de blastocisto, respectivamente. Ao se utilizar o sêmen acrescido de 0,5% de NP, observou-se média de 23 e 23,5 COCs totais e viáveis; 54,46% e 53,09% de taxa de clivagem; 12,28% e 16,79% de formação de blastocisto, ao se utilizar o meio base e comercial, respectivamente. Em 0,75% de NP adicionado ao sêmencongelado/descongelado, encontrou-se média de 21,5 e 23 para COCs totais e viáveis; 44,08% e 51,96% para taxa de clivagem; 19,33% e 14,22% para formação de blastocisto, em meio base e comercial, respectivamente. Quando se adicionou 1% de NP ao meio diluidor do sêmen, a média encontrada foi de 21 e 22 COCs totais e viáveis; 30,35% e 67,85% para taxa de clivagem; 12,5% e 3,57% para a taxa de formação de 
blastocisto, em meio base e comercial, respectivamente. Os resultados parciais indicam efeito do extrato natural sobre a PIVE em bovinos, sendo que a taxa de clivagem tende a ser menos afetada que a produção de blastocisto, que diminuiu à medida que se aumentou a concentração de extrato natural. No entanto, o número de rotinas precisa ser ampliado para subsidiar essa percepção.